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液相色谱仪的操作小要求
发表时间:2020-11-16  |  点击率:309
  操作液相色谱仪的要求
  1.流动相必须用HPLC级的试剂,使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45μm或更细的膜过滤)。
  2.流动相过滤后要用超声波脱气,脱气后应该恢复到室温后使用。
  3.不能用纯乙腈作为流动相,这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。
  4.使用缓冲溶液时,做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时,然后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上,以充分洗去离子。对于柱塞杆外部,做完样品后也必须用去离子水冲洗20mL以上。
  5.长时间不用仪器,应该将柱子取下用堵头封好保存,注意不能用纯水保存柱子,而应该用有机相(如,甲醇等),因为,纯水易长霉。
  6.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。
  7.C18柱不能进蛋白样品,血样、生物样品。
  8.堵塞导致压力太大,按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查并清洗,清洗方法:
  ①以异丙醇作溶剂冲洗;
  ②放在异丙醇中间用超声波清洗;
  ③用10%稀硝酸清洗;
  9.气泡会致使压力不稳,重现性差,所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。
  10.如果进液管内不进液体时,要使用注射器吸液:通常在输液前要进行流动相的清洗。
  11.要注意柱子的pH值范围,不得注射强酸强碱的样品,特别是碱性样品。
  12.更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边靖洗,然后插入新的流动相中。更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。
  举个例子:
  1.泵
  泵是液相色谱仪的心脏。处于良好工作状态的泵,基线平稳,保留时间重现性好,梯度洗脱时压力变化缓慢而且平稳:
  1)选择优质的溶剂和试剂,在进入仪器前用 0.45μm 膜过滤,并进行脱气处理;
  2)泵开始使用时,一定要用合适的流动相彻底清洗干净;
  3)定期检查并更换在线过滤片及有关的垫圈,经常清洗进液处的微孔滤头;
  4)改变流动相时,应注意沉淀的产生,以防止泵堵塞;
  2.色谱柱
  色谱柱是化合物分离的关键。保养良好的色谱柱具有很高的塔板数,基线平稳:
  1)色谱柱比较娇气不能够碰撞、弯曲或强烈震荡;安装时要保证阀件或管路的清洁;
  2)流动相在使用前必须进行脱气处理,尽量不使用或少使用高粘度的流动相;
  3)在满足灵敏度的前提下,尽可能的使用小进样量。如果样品比较脏,要进行净化或提纯处理;
  4)分析结束后要清洗掉进样阀中残留的样品,并用流动相或适当的溶剂清洗色谱柱;
  5)如,长期不用,用适当的有机溶剂保存并封闭或定期补充合适的流动相。
  3.检测器
  分析完成后,马上关闭检测器。
  4.进样器
  分析结束后反复冲洗进样口,防止样品的交叉污染或堵塞。
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